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    GV-CT-DNA植物基因組DNA提取試劑盒(CTAB法)

    Genview

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    Cat #:GV-CT-DNA-50/ GV-CT-DNA-100
    一、試劑盒組成、儲存、穩(wěn)定性

    成分
    50 T
    100T 注意事項
    Buffer GA1
    45ml 
    90ml (1)試劑中有巰基乙醇,有稍微
    的刺激性氣味屬正常 。
    (2)-20℃保存.

    Buffer GA2
    50ml 
    100ml
    Buffer GA3 
    2ml 
    4ml
    Buffer GA4
    500μl
    1ml 
    2ml 離心管
    50 個×2
    50 個×4
    Handbook
    1 1

    二、自備試劑
    氯仿、異戊醇、乙醇、滅菌雙蒸水
    三、操作步驟
    1. 取植物新鮮組織 50mg 或者干粉樣品 30mg,加入液氮充分研磨成粉末狀。樣品量不應(yīng)超過 50mg(干
    粉樣品 30mg),過多的樣品使得裂解不充分,最終會導(dǎo)致基因組 DNA 提取量減少且純度低。
    2. 將粉末放到裝有 800ul Buffer GA1 的 2ml 離心管,60℃預(yù)熱 30min。
    3. 其間混勻 2~3 次,取出樣品于室溫放置。(如需消化 RNA,可在此步驟加入 Buffer GA4 ,室溫放置 10min)
    4. 待樣品冷卻到室溫,加入 800ul 氯仿:異戊醇(24:1)。
    5. 振蕩混勻,12000rpm 離心 15min。
    6. 取上清到一新離心管中加入 1.5 倍體積 Buffer GA2(1ml 左右)。
    7. 放置 20—30min,12000rpm 離心 15min,輕輕去掉上清。
    8. 將沉淀晾干溶于 200ul TE-buffer 或滅菌雙蒸水(溶解)。
    9. 加入 400ul 無水乙醇,20ul Buffer GA3,-20℃沉淀 1h。
    10.4℃12000rpm 離心 15min,輕輕去掉上清。
    11.500ul 75%乙醇洗,12000rpm 離心 10min,輕輕去掉上清。
    12.加入 30-50ul TE buffer 或滅菌雙蒸水溶 DNA。
    13.瓊脂糖電泳檢測(用 0.8%瓊脂糖凝膠電泳檢測,電泳緩沖液 0.5×TBE)。


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